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ChainFree^? 系列標簽抗體免疫共沉淀試劑盒簡介

       DNA重組技術(shù)使目標蛋白帶上特定標簽，表達的融合蛋白再采用標簽抗體來檢測，為科學(xué)研究帶來了極大便利。常見的蛋白標簽包括Flag、HA、Myc、V5等，這些標簽分子量小，對融合蛋白的活性和細胞內(nèi)定位幾乎沒有影響。  

        針對不同樣本的需求，輝駿生物開發(fā)了分別針對植物和動物樣本的5款ChainFree^?標簽抗體免疫共沉淀試劑盒：

        實驗前先將Flag標簽、HA標簽或GFP標簽等與目標蛋白在樣本中融合表達。裂解樣本后，將標簽抗體磁珠加入樣本中，標簽抗體與目標融合蛋白及其結(jié)合蛋白形成復(fù)合體，去除未結(jié)合的蛋白后，可以采用多種方法洗脫蛋白質(zhì)。分離的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測已知蛋白，也可以用質(zhì)譜（LC-MS/MS）鑒定未知蛋白。

免疫共沉淀CoIP試劑盒的應(yīng)用方向

蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式，蛋白質(zhì)會通過結(jié)合不同的伙伴來行駛不同的功能，形成復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。CO-IP試劑盒采用Flag抗體磁珠、HA抗體磁珠、Myc抗體磁珠、GFP抗體磁珠或mCherry抗體磁珠捕獲樣本中天然結(jié)合的Flag融合蛋白、HA融合蛋白、Myc融合蛋白、GFP融合蛋白或mCherry融合蛋白，以及它們的互作蛋白，不需要購買誘餌蛋白的IP級別抗體，只需要在細胞或組織中表達融合flag標簽的誘餌蛋白，即可以利用標簽抗體完成內(nèi)源性Co-IP實驗。以下列舉了可應(yīng)用COIP試劑盒的幾個研究方向：

1. 病毒、細菌等病原體侵染宿主細胞的機制；

2. 酶和底物的作用機制；

3. 天然狀態(tài)蛋白調(diào)控復(fù)合體的研究。

 ChainFree^?系列CoIP試劑盒-輝駿生物產(chǎn)品優(yōu)勢

1. 無抗體輕重鏈污染：IP復(fù)合物無論采用非變性洗脫還是變性洗脫，均不會出現(xiàn)抗體的輕、重鏈污染問題。

2. 親和力強：低nM級別親和力，輕松應(yīng)對低拷貝基因，或難轉(zhuǎn)染細胞系。

3. 特異性強：抗體磁珠通過了20株以上的空白細胞系檢測，不易產(chǎn)生非特異吸附。

4. 結(jié)合量高：每10 μL抗體磁珠可結(jié)合約10~15 μg重組蛋白。

5. 兼容性好：無論標簽在誘餌蛋白的N端或C端，都可以識別。

6. 穩(wěn)定性好：通過了45℃高溫測試。

輝駿生物ChainFree^?標簽抗體磁珠與其他同類產(chǎn)品對比圖

Western-Blot結(jié)果顯示：輝駿生物的ChainFree^? 磁珠對誘餌蛋白的親和力強，IP效果優(yōu)于sigma產(chǎn)品，遠高于國產(chǎn)同類磁珠效果，并且不會產(chǎn)生抗體輕重鏈污染。

輝駿生物ChainFree^?標簽抗體磁珠穩(wěn)定性測試圖

Western-Blot結(jié)果顯示：ChainFree? 磁珠在45℃條件下放置7天，穩(wěn)定性幾乎不受影響。

Flag/HA/Myc/GFP/mCherry標簽免疫共沉淀試劑盒使用流程簡述

1. 裂解樣本；

2. 樣本裂解液與Flag磁珠（或HA磁珠、V5磁珠）孵育；

3. 漂洗、洗脫得到目標蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。

Anti-Flag CoIP試劑盒使用案例

Co-IP western-blot結(jié)果圖

Flag免疫共沉淀（flag co-ip）試劑盒—客戶文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究內(nèi)容】：客戶發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時候會發(fā)生磷酸化并移位到細胞核。客戶利用酵母雙雜交技術(shù)找到兩個核蛋白ABF4 and ABI5會與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實驗進一步證實了FREE與這兩個蛋白的互作。后續(xù)實驗表明，F(xiàn)REE1通過抑制ABF4、ABI5對下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號通路。 使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS實驗