您是否對免疫沉淀CoIP和免疫共沉淀IP之間的差異感到困惑？這兩種技術(shù)表面上看起來很相似，但它們在應(yīng)用和實驗設(shè)置上存在分歧。免疫沉淀涉及從樣品中分離靶蛋白質(zhì)與其他蛋白質(zhì)的混合物。它利用抗體來固定特定的蛋白質(zhì)。另一方面，免疫共沉淀使研究人員能夠識別和表征蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用，使其更上一層樓。這項技術(shù)旨在從復(fù)雜的混合物中挖掘出目標(biāo)蛋白及其伙伴蛋白，為它們的整合功能提供重要的見解。總之，雖然免疫沉淀分離特定的感興趣的蛋白質(zhì)，但免疫共沉淀深入研究樣品內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的動態(tài)網(wǎng)絡(luò)。

實驗設(shè)計

免疫沉淀和免疫共沉淀之間的二分法植根于實驗設(shè)計的細節(jié)。免疫沉淀需要明智地使用特異性抗體以從蛋白質(zhì)的復(fù)雜混合物中提取目標(biāo)蛋白質(zhì)。最重要的抗體鎖存到所需的蛋白質(zhì)上，產(chǎn)生有趣的抗原-抗體復(fù)合物的形成，然后使其沉淀，通常利用蛋白質(zhì)A/G珠或類似的技術(shù)。這一多方面的魔法在其確保目標(biāo)蛋白質(zhì)的純化和濃縮以用于下游分析的能力方面是無與倫比的。

在這個復(fù)雜的硬幣的另一面是免疫共沉淀。這種方法將感興趣的蛋白質(zhì)及其相互作用的伴侶一起并以一定的技巧拋到聚光燈下。為了實現(xiàn)這一點，抗體（當(dāng)然）被部署，其全神貫注地專注于感興趣的蛋白質(zhì)。這種大膽的方法旨在捕獲感興趣的蛋白質(zhì)及其靈巧的隨從時，研究它們在復(fù)合物中的相互作用。這種復(fù)雜的生物學(xué)作用網(wǎng)絡(luò)需要尖端技術(shù)，而免疫共沉淀是最有效的方法之一。

應(yīng)用領(lǐng)域

IP免疫沉淀的科學(xué)技術(shù)是一種高度有效的方法，主要用于從復(fù)雜混合物中分離和純化特定的感興趣蛋白質(zhì)。這種廣泛使用的方法提供了大量有價值的見解蛋白質(zhì)研究的不同方面，如蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，功能，翻譯后修飾，和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用。通過使用免疫沉淀作為工具，研究人員可以研究特定蛋白質(zhì)在給定樣品中的存在和分布，以及其生化特性。

然而，對于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的研究，通常采用稱為免疫共沉淀的更先進和復(fù)雜的方法。該技術(shù)專門設(shè)計用于鑒定和分離與靶蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，提供對復(fù)合物內(nèi)蛋白質(zhì)的功能關(guān)系、動力學(xué)和組成的核心見解。此外，從co-IP收集的信息對于分析信號通路、研究蛋白質(zhì)復(fù)合物以及探索與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用相關(guān)的復(fù)雜生物過程是非常寶貴的。因此，免疫共沉淀是蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域中的重要工具，提供了對生物過程的潛在機制和復(fù)雜性的更好的理解。

目標(biāo)選擇

在免疫沉淀的復(fù)雜世界中，靶蛋白的選擇是決定研究成敗的關(guān)鍵步驟。它需要科學(xué)悟性、戰(zhàn)略思維以及對所研究蛋白質(zhì)生物學(xué)功能的深刻理解相結(jié)合。通常，研究人員會仔細研究大量數(shù)據(jù)，尋找蛋白質(zhì)相互作用的線索，與研究問題的相關(guān)性，以及其他特定標(biāo)準(zhǔn)，以確保分離出感興趣的單個蛋白質(zhì)。

但對知識的追求并不止于此。進入免疫共沉淀co-ip，一種將目標(biāo)選擇提升到一個全新的水平的技術(shù)。這種方法將焦點擴展到單個蛋白質(zhì)之外，鼓勵對蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用進行更廣泛的研究，這些相互作用對我們理解復(fù)雜生物系統(tǒng)至關(guān)重要。通過捕獲靶蛋白及其相互作用的伴侶，研究人員可以更深入地研究這些關(guān)系的錯綜復(fù)雜，并揭示構(gòu)成這個非凡網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜組成部分。

下游分析

IP和COIP之后可以進行各種下游分析，例如蛋白質(zhì)印跡、質(zhì)譜或功能測定。然而，下游分析的選擇可能取決于實驗的具體目標(biāo)而不同。免疫沉淀之后通常是如蛋白質(zhì)印跡的技術(shù)以驗證靶蛋白的存在和純度。它也可以用于蛋白質(zhì)定量或檢測特定的翻譯后修飾。另一方面，免疫共沉淀經(jīng)常與質(zhì)譜等技術(shù)結(jié)合，以鑒定蛋白質(zhì)復(fù)合物內(nèi)的相互作用伴侶。這種方法提供了一個更廣泛的觀點，蛋白質(zhì)相互作用，并允許復(fù)雜的組合物和動力學(xué)的表征。

總之，免疫沉淀和免疫共沉淀是蛋白質(zhì)研究中有價值的技術(shù)，但它們在實驗設(shè)計、應(yīng)用、靶點選擇和下游分析方面有所不同。免疫沉淀主要集中在特定蛋白質(zhì)的分離和純化，而免疫共沉淀的目的是捕獲蛋白質(zhì)復(fù)合物并研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。了解這些技術(shù)之間的差異可以讓研究人員根據(jù)他們的研究目標(biāo)和實驗需求選擇最合適的方法。

免疫共沉淀（Co-IP）實驗流程-輝駿生物

內(nèi)源蛋白抗體免疫共沉淀CoIP實驗步驟

標(biāo)簽抗體免疫共沉淀CoIP實驗流程

輝駿生物提供的Co-IP免疫共沉淀技術(shù)服務(wù)分為以下兩種：

1. Co-IP WB，用于檢測某樣本中的誘餌蛋白和待測蛋白是否存在相互作用；

2. Co-IP MS，用于篩選某樣本中的誘餌蛋白與哪些蛋白具有相互作用。

免疫共沉淀Co-IP實驗服務(wù)案例—客戶文章解析

Jiang S.Y. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP.

 Cancer Research. 2019. (中科院1區(qū)，IF=13.312).

膽固醇通過APMAP抑制EGFR降解誘導(dǎo)前列腺癌細胞轉(zhuǎn)移

研究概述

轉(zhuǎn)移性前列腺癌具有很高的致命性。已有報道表明，膽固醇與前列腺癌的發(fā)展有關(guān)；前期研究發(fā)現(xiàn)，膽固醇可以誘導(dǎo)前列腺癌細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），但其作用及潛在機制尚不清楚。本研究證明膽固醇介導(dǎo)APMAP上調(diào)，APMAP通過與EGFR競爭結(jié)合EPS15R，進而抑制EGFR降解，激活ERK1/2通路，促進前列腺癌細胞EMT；提出APMAP可能是一種關(guān)鍵的調(diào)節(jié)劑，為高脂肪飲食、肥胖和癌癥轉(zhuǎn)移之間提供了聯(lián)系。

研究路線

免疫共沉淀coip實驗—輝駿生物高分客戶文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究內(nèi)容】：客戶發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時候會發(fā)生磷酸化并移位到細胞核?？蛻衾媒湍鸽p雜交技術(shù)找到兩個核蛋白ABF4 and ABI5會與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實驗進一步證實了FREE與這兩個蛋白的互作。后續(xù)實驗表明，F(xiàn)REE1通過抑制ABF4、ABI5對下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號通路。 使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀co-ip、Co-IP MS實驗

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究內(nèi)容】：客戶利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選出膽固醇致前列腺癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通過在前列腺癌細胞表達3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及質(zhì)譜鑒定技術(shù)，客戶發(fā)現(xiàn)EPS15R可與APMAP結(jié)合。進一步的研究證實，體內(nèi)EPS15R-APMAP復(fù)合物通過EGFR致使細胞發(fā)生EMT。 使用相關(guān)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)、質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. 【研究內(nèi)容】：前期研究表明UBAP2L蛋白參與應(yīng)激顆粒形成?？蛻粼谶@項研究中，用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三個應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的重要蛋白有相互作用。這些蛋白復(fù)合物介導(dǎo)了應(yīng)激顆粒的形成。 使用相關(guān)技術(shù)：coip技術(shù)服務(wù)、質(zhì)譜鑒定、修飾位點鑒定

CoIP實驗技術(shù)外包—輝駿服務(wù)優(yōu)勢

1. 近十年服務(wù)經(jīng)驗，服務(wù)客戶眾多，案例發(fā)表在Nature Cell Biology、Nature Plants、Cancer Research等知名期刊上。

2. 對蛋白互作的篩選鑒定理解深刻，擅長針對客戶具體情況提出合適的方案建議。

3. 自有分子及細胞生物實驗平臺，能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線。

4. 自有蛋白質(zhì)組學(xué)平臺，對微量CoIP實驗產(chǎn)物的質(zhì)譜鑒定有十足的把控能力，對后續(xù)的生物信息分析有獨到的見解。

5. 售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章，確保客戶安心免疫共沉淀下游實驗及投稿。